無菌室在消毒處理后，無菌試驗(yàn)前及操作過程中需檢查空氣中菌落數(shù)，以此來判斷無菌室是否達(dá)到規(guī)定的潔凈度，常用沉降菌法。一般無菌室的空間潔凈度要求達(dá)到 10000 級，萬級潔凈度對空間菌落的要求是：靜態(tài)檢測，自然沉降菌 CFU/ 皿；操作區(qū)域如超凈工作臺、生物安全柜里需要達(dá)到潔凈度 100 級，百級潔凈度對空間菌落的要求是：靜態(tài)檢測，自然沉降菌 CFU/ 皿。

一、沉降菌檢測方法

以無菌方式將 3 個(gè)營養(yǎng)瓊脂平板帶入無菌操作室，在操作區(qū)臺面左、中、右各放 1 個(gè)；打開平板蓋，在空氣中暴露 30min 后將平板蓋好，置 36℃士 1℃培養(yǎng) 48h，取出計(jì)數(shù)。

二、無菌室的滅菌方式

1、紫外線照射

紫外線滅菌是利用適當(dāng)波長的紫外線破壞微生物機(jī)體細(xì)胞中的 DNA 或 RNA 結(jié)構(gòu)，造成生長性細(xì)胞死亡來達(dá)到滅菌效果，屬于一種物理方式的滅菌。該方法可以殺滅各種微生物，包括細(xì)菌、病毒、真菌、立克次體及支原體等，是實(shí)驗(yàn)室中最常用的滅菌方式。根據(jù) 2002 年國家衛(wèi)生部發(fā)布的《消毒技術(shù)規(guī)范》，紫外燈的要求是紫外強(qiáng)度不得低于 70uW/c㎡（紫外燈 1m 處），空間內(nèi)的紫外燈布局要求每㎡不少于 1.5W。并做到定期（至少每年 1 次）更換新的紫外燈管，以確保紫外燈管滅菌持續(xù)有效。

2、臭氧滅菌

臭氧是一種強(qiáng)氧化劑，通過氧化分解細(xì)菌內(nèi)部葡萄糖所需的酶，使細(xì)菌滅活死亡。使用臭氧滅菌，殺菌徹底，無殘留，殺菌廣譜，可殺滅細(xì)菌繁殖體和芽孢、病毒、真菌等，并可破壞肉毒桿菌病毒。另外，臭氧對霉菌有極強(qiáng)的殺滅作用。用臭氧消毒空氣，必須是在封閉空間，且室內(nèi)無人條件下進(jìn)行，消毒后至少 30min 才能進(jìn)入。一般滅菌時(shí)間選擇 30min 即可，要求空間中臭氧濃度不低于 20mg/m3。

3、化學(xué)熏蒸

采用易揮發(fā)氣化的化學(xué)物質(zhì)的蒸汽，對空間微生物進(jìn)行殺滅的目的，常用甲醛、過氧化氫、過氧乙酸等。其中過氧化氫分解產(chǎn)物為水和氧氣，擁有無殘留的特性因此采用此方法的方案較多。其他的化學(xué)熏蒸方法的缺點(diǎn)是易殘留，對人體有一定傷害。每次熏蒸后，至少需要通風(fēng) 24h 才可以使用。有需要的朋友可了解一下 #美卓過氧化氫消毒機(jī) #

最后，無菌室作為微生物檢測的空間，每一個(gè)質(zhì)檢員都要了解它的狀態(tài)，才能保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度。

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