空間滅菌高標(biāo)準(zhǔn)潔凈環(huán)境手段，達(dá)到微生物殺滅的可驗(yàn)證效果。汽化過(guò)氧化氫（VHP）作為目前應(yīng)用的空間滅菌技術(shù)，良好的穿透性、無(wú)殘留性和高滅活能力，在制藥、生物實(shí)驗(yàn)室、食品深加工等領(lǐng)域中逐漸成為方案。具體的判斷標(biāo)準(zhǔn)需要通過(guò)生物指示劑來(lái)顯示，汽化過(guò)氧化氫滅菌生物指示劑怎么用？怎么看消毒工作有沒(méi)有到位？

一、生物指示劑的構(gòu)成和作用

生物指示劑是由對(duì)滅菌方式高度耐受的微生物芽孢制備成的標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)工具，在VHP滅菌中普遍使用的為枯草芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌的高濃度干燥孢子載體。芽孢天然高抗氧化能力，能耐受高濃度過(guò)氧化氫的氧化應(yīng)激，在滅菌過(guò)程中作為最難被殺死的“挑戰(zhàn)對(duì)象”存在。指示劑被固定于不銹鋼片、塑料圓片、玻璃纖維紙或他惰性材質(zhì)上，形成一定數(shù)量（為10?數(shù)量級(jí)）的可計(jì)數(shù)菌落載體，統(tǒng)一布局、后續(xù)培養(yǎng)和結(jié)果判斷。

二、生物指示劑的布點(diǎn)方法和使用細(xì)節(jié)

在執(zhí)行汽化過(guò)氧化氫滅菌驗(yàn)證任務(wù)時(shí)，生物指示劑的布點(diǎn)位置、數(shù)量和方式對(duì)滅菌評(píng)估的性決定意義。標(biāo)準(zhǔn)操作應(yīng)以“最難滅殺區(qū)域”為布點(diǎn)。布點(diǎn)需覆蓋高空、中層、地面，不可僅局限于操作平面。需考慮復(fù)雜結(jié)構(gòu)表面、通風(fēng)死角、隔斷內(nèi)腔、儀器底部、抽屜縫隙、門軸背面等形成氣體薄弱區(qū)的位置。對(duì)潔凈室或設(shè)備腔體言，應(yīng)集中布置，以空間分布均勻、結(jié)構(gòu)多樣化為原則進(jìn)行設(shè)置。

生物指示劑在使用前應(yīng)未受污染，儲(chǔ)存于低溫干燥避光環(huán)境下，孢子提前失活或受潮變質(zhì)。開啟包裝后應(yīng)立即部署，暴露時(shí)間過(guò)長(zhǎng)造成數(shù)據(jù)偏差。布點(diǎn)時(shí)可使用不干膠、滅菌膠帶或輕質(zhì)磁貼將指示劑固定在目標(biāo)表面，穩(wěn)定性不干擾滅菌氣流循環(huán)。布點(diǎn)數(shù)量空間體積和驗(yàn)證目的定，小型設(shè)備艙體布點(diǎn)不少于6個(gè)，大型空間可布點(diǎn)20個(gè)以上。布點(diǎn)記錄詳細(xì)標(biāo)明位置編號(hào)、部署時(shí)間、操作者姓名等信息，以便追溯和校準(zhǔn)。滅菌周期結(jié)束后，應(yīng)在第一時(shí)間收集所有指示劑，并立即轉(zhuǎn)運(yùn)至微生物實(shí)驗(yàn)區(qū)進(jìn)行培養(yǎng)，在現(xiàn)場(chǎng)延遲操作孢子激活或死亡狀態(tài)發(fā)生變化。

三、培養(yǎng)讀取和效果判斷

收集后的生物指示劑需按照菌種適配的培養(yǎng)條件進(jìn)行處理，采用TSA培養(yǎng)基或?qū)Ｓ脧?fù)蘇液進(jìn)行24-48小時(shí)恒溫培養(yǎng)。常用溫度設(shè)定為56°C或37°C，具體依孢子類型決定。孢子未被滅殺，在適宜溫度和濕度下即可迅速萌發(fā)形成菌落或渾濁液體，目視判斷是否生長(zhǎng)以判定滅菌成效。陽(yáng)性指示劑表現(xiàn)為菌落增長(zhǎng)或液體渾濁，陰性指示劑則應(yīng)無(wú)菌落形成。所有結(jié)果應(yīng)配合陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照進(jìn)行判讀，操作過(guò)程中無(wú)外源污染或技術(shù)失誤干擾數(shù)據(jù)。

完整的生物指示劑驗(yàn)證流程僅停留在有無(wú)生長(zhǎng)的判斷，記錄培養(yǎng)批次、觀察時(shí)間、環(huán)境條件和操作痕跡，生成完整的滅菌驗(yàn)證報(bào)告并歸檔保存。在藥品生產(chǎn)等高監(jiān)管領(lǐng)域，三批以上重復(fù)滅菌并均獲得陰性結(jié)果后，方可認(rèn)定該VHP滅菌驗(yàn)證。在某批次中出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，則需重新布點(diǎn)性、VHP濃度分布、氣流循環(huán)效率、滅菌時(shí)間設(shè)定、空間結(jié)構(gòu)遮擋等因素，明確滅菌失敗的實(shí)際原因，并對(duì)設(shè)備參數(shù)或空間結(jié)構(gòu)進(jìn)行整改后再次進(jìn)行驗(yàn)證。生物指示劑的性不止體現(xiàn)在是否有菌，更在于它能用最簡(jiǎn)單的方式揭示最深層的滅菌問(wèn)題。