無菌室在消毒處理后，無菌試驗前及操作過程中需檢查空氣中菌落數(shù)，以此來判斷無菌室是否達到規(guī)定的潔凈度，常用沉降菌法。一般無菌室的空間潔凈度要求達到10000級，萬級潔凈度對空間菌落的要求是：靜態(tài)檢測，自然沉降菌CFU/皿；操作區(qū)域如超凈工作臺、生物安全柜里需要達到潔凈度100級，百級潔凈度對空間菌落的要求是：靜態(tài)檢測，自然沉降菌CFU/皿。

一、沉降菌檢測方法

以無菌方式將3個營養(yǎng)瓊脂平板帶入無菌操作室，在操作區(qū)臺面左、中、右各放1個；打開平板蓋，在空氣中暴露30min后將平板蓋好，置36℃士1℃培養(yǎng)48h，取出計數(shù)。

二、無菌室的滅菌方式

1、紫外線照射

紫外線滅菌是利用適當波長的紫外線破壞微生物機體細胞中的DNA或RNA結(jié)構(gòu)，造成生長性細胞死亡來達到滅菌效果，屬于一種物理方式的滅菌。該方法可以殺滅各種微生物，包括細菌、病毒、真菌、立克次體及支原體等，是實驗室中最常用的滅菌方式。根據(jù)2002年國家衛(wèi)生部發(fā)布的《消毒技術(shù)規(guī)范》，紫外燈的要求是紫外強度不得低于70uW/c㎡（紫外燈1m處），空間內(nèi)的紫外燈布局要求每㎡不少于1.5W。并做到定期（至少每年1次）更換新的紫外燈管，以確保紫外燈管滅菌持續(xù)有效。

2、臭氧滅菌

臭氧是一種強氧化劑，通過氧化分解細菌內(nèi)部葡萄糖所需的酶，使細菌滅活死亡。使用臭氧滅菌，殺菌徹底，無殘留，殺菌廣譜，可殺滅細菌繁殖體和芽孢、病毒、真菌等，并可破壞肉毒桿菌病毒。另外，臭氧對霉菌有極強的殺滅作用。用臭氧消毒空氣，必須是在封閉空間，且室內(nèi)無人條件下進行，消毒后至少30min才能進入。一般滅菌時間選擇30min即可，要求空間中臭氧濃度不低于20mg/m3。

3、化學熏蒸

采用易揮發(fā)氣化的化學物質(zhì)的蒸汽，對空間微生物進行殺滅的目的，常用甲醛、過氧化氫、過氧乙酸等。其中過氧化氫分解產(chǎn)物為水和氧氣，擁有無殘留的特性因此采用此方法的方案較多。其他的化學熏蒸方法的缺點是易殘留，對人體有一定傷害。每次熏蒸后，至少需要通風24h才可以使用。有需要的朋友可了解一下#美卓過氧化氫消毒機#

最后，無菌室作為微生物檢測的空間，每一個質(zhì)檢員都要了解它的狀態(tài)，才能保證實驗結(jié)果的準確度。