氣（汽）體熏蒸消毒效果的驗證，例如VHP（Vaporized Hydrogen Peroxide）滅菌

1.1.消毒劑濃度及作用時間的測試殺菌劑量包含殺菌因子的強(qiáng)度和作用時間兩個參數(shù)。在確定實際使用劑量時需考慮污染微生物的種類和數(shù)量；有機(jī)物的含量；殺菌因子的穩(wěn)定性；環(huán)境的溫濕度變化；腐蝕性的強(qiáng)弱；酸堿度；消毒對象的性質(zhì)；允許使用的濃度；允許作用的時間；殺菌因子的穿透能力；對人體和環(huán)境的危害等。

評價消毒劑消毒效果的實驗室階段，消毒劑濃度應(yīng)選擇該消毒劑對某一有代表性消毒對象的最低使用濃度。試驗應(yīng)設(shè)3個不同作用時間，原則上第一時間為說明書規(guī)定的最短作用時間的0.5倍，第二時間為最短作用時間，第三時間為最短作用時間的1.5倍。對多用途的消毒劑，消毒對象所涉及的微生物相同時，若使用濃度相同，選擇各種用途中最短的作用時間。若使用時間相同，選擇各種用途中最低的使用濃度。使用濃度低，作用時間短者與使用濃度高和作用時間長者同時存在時，以前者為準(zhǔn)。使用濃度高，作用時間短者與使用濃度低，作用時間長者同時存在時，每個劑量均須進(jìn)行試驗。

在對消毒劑進(jìn)行監(jiān)督監(jiān)測時，定量殺菌試驗的消毒劑濃度和作用時間選擇消毒對象中抗力最強(qiáng)的微生物，以規(guī)定的最低濃度和最短時間驗證其消毒效果。對用于滅菌的消毒劑則以說明書中規(guī)定的使用濃度和其0.5倍的作用時間驗證其滅菌效果。

1.2.生物指示劑的挑戰(zhàn)模擬現(xiàn)場消毒指示菌，微生物可以是CANS-LC05-A002及RB/T199-2018里面推薦的芽孢或者是針對于不同的實驗室特性采用特異的微生物作為挑戰(zhàn)。通常情況下，選用枯草桿菌黑色變種芽孢（ATCC9372）或嗜熱脂肪芽孢（ATCC797953）作為指示菌，但在污染對象很明確的前提下，可根據(jù)試驗微生物的種類，選擇抗力相似的微生物作為消毒指示微生物，如單純?yōu)椴《緦ο髸r，可選用脊髓灰質(zhì)炎病毒-Ⅰ型疫苗株，如單純?yōu)榻Y(jié)核桿菌污染時，可選用龜分枝桿菌膿腫亞種（ATCC93326），如單純?yōu)檎婢廴緯r，可選用黑曲霉菌（ATCC16406）。

化學(xué)消毒劑噴淋消毒效果的驗證

2.1.人為微生物污染的挑戰(zhàn)消毒劑濃度及作用時間：根據(jù)測試用菌種和消毒劑對該菌的殺滅能力，選定1個消毒劑濃度（即消毒劑使用說明書中指定的最低濃度）和3個作用時間（最短作用時間，最短作用時間的0.5倍，最短作用時間的1.5倍）。

測試微生物：金黃色葡萄球菌ATCC 6538、銅綠假單胞菌ATCC 15442、大腸桿菌8099、枯草桿菌黑色變種ATCC 9372、龜分枝桿菌膿腫亞種ATCC 93326、白色葡萄球菌8032、白色念珠菌ATCC10231、黑曲霉菌ATCC16404。在上述規(guī)定的菌株基礎(chǔ)上，根據(jù)消毒劑特定用途或試驗特殊需要，還可增選其他菌株。測試重復(fù)次數(shù)：3次測試合格標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌各次的殺滅對數(shù)值均≥3.00；真菌各次殺滅對數(shù)值均≥3.00

2.2.自然微生物殺滅的挑戰(zhàn)根據(jù)實際情況，選擇有代表性的房間并在室內(nèi)無人情況下進(jìn)行消毒效果觀察。觀察時，在消毒處理前進(jìn)行空氣中自然菌采樣，作為消毒前樣本(陽性對照）。消毒處理后，再作一次采樣，作為消毒后的試驗樣本。試驗重復(fù)3次或以上。計算出每次的消亡率。除有特殊要求者外，對無人室內(nèi)進(jìn)行的空氣消毒，每次的自然菌消亡率均≥90%者為合格。

針對于病毒殺滅的測試

用具有一定代表性的、活的病毒及其細(xì)胞感染技術(shù)，評價各種用途的消毒因子對測試病毒的殺滅效果。

試驗用病毒株：脊髓灰質(zhì)炎病毒1型（poliovirus-Ⅰ，PV-Ⅰ）疫苗株；艾滋病病毒1型（HIV-1）美國株。

宿主細(xì)胞：可采用VERO細(xì)胞系、BGM細(xì)胞、Hela細(xì)胞系或FL細(xì)胞系，作為PV-1的測試細(xì)胞。用含有人T淋巴細(xì)胞白血病病毒1型（human T cell leukemiavirus 1，HTLV-1）基因的人淋巴細(xì)胞（MT4株）作為HIV-1的測試細(xì)胞。

病毒滅活試驗：（1）制備病毒懸液（2）病毒滅活滴度計算（3）殘留消毒劑化學(xué)中和法的鑒定試驗（4）殘留消毒劑物理去除方法的鑒定試驗（5）脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗（6）艾滋病病毒滅活試驗

利用化學(xué)消毒劑對生物安全實驗室進(jìn)行消毒是保證實驗室生物安全操作的重要方法，并且無菌藥品GMP檢查指南要求：“企業(yè)應(yīng)對消毒劑對不同材料表面的消毒有效性（包括消毒劑與材料表面接觸時間等關(guān)鍵參數(shù)）進(jìn)行研究并對所用消毒劑的效果進(jìn)行確認(rèn)”。