在生物實(shí)驗(yàn)室中，污染是一個(gè)已經(jīng)明確存在并會(huì)造成嚴(yán)重后果的問題。污染可分為三大類（物理、化學(xué)和生物）。最常見的生物污染是細(xì)菌、霉菌、酵母菌、病毒、支原體以及其他細(xì)胞系的交叉污染。本綜述概述了污染物的主要關(guān)鍵來(lái)源和控制方案。污染的關(guān)鍵源頭是在實(shí)驗(yàn)室工作開始到結(jié)束期間突然或故意將污染物引入所需的系統(tǒng)。為了克服這一挑戰(zhàn)，日常必須采取多種策略，如從信譽(yù)良好的基因庫(kù)中獲取純凈、有活力的細(xì)胞；定期檢查培養(yǎng)物的特性；采用良好的無(wú)菌技術(shù)；常規(guī)使用抗生素等。總之，本文建議在培養(yǎng)物受到感染的幾天內(nèi)對(duì)其進(jìn)行目視檢查，從而降低或消除污染的頻率和嚴(yán)重程度。

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引言

污染是指在取樣、保存、加工、儲(chǔ)存、轉(zhuǎn)移、包裝和運(yùn)輸過程中，將化學(xué)、微生物或物理等雜質(zhì)帶入或帶入起始或中間細(xì)胞培養(yǎng)物。細(xì)胞培養(yǎng)污染物的定義是培養(yǎng)系統(tǒng)中的某些元素，由于可能對(duì)系統(tǒng)或其使用產(chǎn)生不利影響而不受歡迎。細(xì)胞培養(yǎng)物污染是一些微生物實(shí)驗(yàn)室最常遇到的問題，有時(shí)會(huì)造成非常嚴(yán)重的后果。總的來(lái)說，造成污染的原因大多是可避免的程序錯(cuò)誤和錯(cuò)誤的技術(shù)指導(dǎo)。微生物廣泛分布于環(huán)境中，不受任何限制，甚至在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的不同地方都有它們的身影。對(duì)于使用微生物培養(yǎng)物的研究人員來(lái)說，微生物污染是最大的世界性障礙之一。它可能會(huì)損失實(shí)驗(yàn)室中有價(jià)值的菌株。假陽(yáng)性培養(yǎng)物是由于常見或不常見的實(shí)驗(yàn)室污染物造成的微生物實(shí)驗(yàn)室報(bào)告。由于缺乏適當(dāng)?shù)墓芾恚⑸飳?shí)驗(yàn)室中會(huì)出現(xiàn)高濃度的微生物污染物。這是一個(gè)全球關(guān)注的健康問題，導(dǎo)致難以獲得準(zhǔn)確的研究成果。它被人工或系統(tǒng)地引入到我們的培養(yǎng)液中，損害了我們的工作質(zhì)量。最近，許多文章都提到了這一問題，以前的報(bào)告也證明了這一挑戰(zhàn)。最后，為了減少污染物，首先要應(yīng)用良好的實(shí)驗(yàn)室實(shí)踐，其次要遵循適當(dāng)?shù)恼f明[2、6、7和12]。

污染物正受到高度關(guān)注，但對(duì)其來(lái)源和過程還不甚了解。本研究的主要方法論部分是在觀察性隊(duì)列研究和工作區(qū)（實(shí)驗(yàn)室）長(zhǎng)年目測(cè)調(diào)查經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行的。當(dāng)前研究的目的是確定實(shí)驗(yàn)室內(nèi)細(xì)菌污染的關(guān)鍵來(lái)源，然后回答交叉污染是如何發(fā)生的？本文旨在介紹防止微生物、物理或化學(xué)交叉污染的適當(dāng)和必要方案，減少假陽(yáng)性培養(yǎng)報(bào)告，并通過實(shí)用技術(shù)最大限度地提高微生物實(shí)驗(yàn)室的真實(shí)結(jié)果。

細(xì)胞培養(yǎng)污染的類型

2.1物理污染物

物理污染物是指作為污染物的天然或人工成分。污染物。它也被稱為不需要的異物，如玻璃碎片、金屬、石塊、塑料、不相干的植物物質(zhì)、毛發(fā)、纖維、移液管、儲(chǔ)存設(shè)備、儀器、鋁箔或紙張殘留物以及培養(yǎng)箱中殘留的灰塵顆粒。消毒劑或清潔劑殘留在培養(yǎng)箱中的鋁箔或紙張殘留物和灰塵微粒也屬于此類。

2.2化學(xué)污染

化學(xué)污染是指任何非生物物質(zhì)的存在都會(huì)對(duì)培養(yǎng)系統(tǒng)造成不良影響。對(duì)培養(yǎng)系統(tǒng)產(chǎn)生不良影響。在任何情況下，它對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)都是無(wú)用的，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。它可能會(huì)產(chǎn)生毒性。培養(yǎng)基、血清、水中的雜質(zhì)、金屬離子、內(nèi)毒素、自由基、洗滌劑和細(xì)菌。自由基、洗滌劑、殺菌劑或殺蟲劑殘留物是主要成分。除此之外、二氧化碳培養(yǎng)箱所用氣體中的雜質(zhì)也包括在內(nèi)。

2.3.生物污染

生物污染物是有生命的，可細(xì)分為細(xì)菌、霉菌、酵母菌、病毒、藻類、原生動(dòng)物等多個(gè)分支、病毒、藻類、原生動(dòng)物、無(wú)脊椎動(dòng)物等，因此容易受到其他細(xì)胞系的交叉污染。交叉污染。微生物物種的污染，可通過物理方式（共用培養(yǎng)基和試劑、使用未拔下的電源插頭等）傳播。共用培養(yǎng)基和試劑、使用未拔下插頭的移液管、處理不當(dāng)和使用未經(jīng)消毒的試劑、意外溢出或不正常接觸培養(yǎng)基溢出或與無(wú)生命物體的非正常接觸）和生物途徑（直接或間接接觸手）。任何類型的微生物實(shí)驗(yàn)室對(duì)生物污染都很敏感。因此因此，空氣中的微生物很容易轉(zhuǎn)移、進(jìn)入和生長(zhǎng)出所需的培養(yǎng)細(xì)胞。其背后的原因是存在大量微生物，而且沒有遵循良好的培養(yǎng)規(guī)范。

杭州美卓生物科技有限公司|微生物實(shí)驗(yàn)室中的污染：來(lái)源、影響與控制策略

污染源

編號(hào)潛在污染源

1-實(shí)地采集的樣本成分和采樣地點(diǎn)。

-樣本量不足和選擇錯(cuò)誤。

-樣本采集和處理設(shè)備不當(dāng)，如塑料或金屬頸管或試管、解剖套件、燒瓶、燒杯、鑷子、移液管、冰盒、玻璃器皿和層流氣流柜。

2-過多的內(nèi)部和外部非生物成分（熱、冷、陽(yáng)光、濕氣）。

-來(lái)自實(shí)驗(yàn)室水槽、空氣、灰塵顆粒、工作臺(tái)、地板、桌子、房間、水源和培養(yǎng)箱。

3-蟲害，尤其是螨蟲。它們會(huì)隨氣流移動(dòng)。由于螨蟲在培養(yǎng)器皿中進(jìn)進(jìn)出出，培養(yǎng)物會(huì)受到污染。人員可能將昆蟲帶入實(shí)驗(yàn)室（頭發(fā)、衣服、鞋子上）。

4-使用保質(zhì)期縮短的培養(yǎng)基。

-用于制備培養(yǎng)基的試劑、溶液、化學(xué)品和水變質(zhì)。

-使用不符合驗(yàn)收規(guī)范的材料。器皿校準(zhǔn)不當(dāng)和設(shè)備故障。

-供應(yīng)品或資源短缺。

5-在所有單位引進(jìn)未經(jīng)授權(quán)和不熟練的人員進(jìn)行樣品的采集、鑒定、定性和保存。

-未受過教育，沒有足夠的能力執(zhí)行所要求的特定任務(wù)。

6-標(biāo)本處理過程中產(chǎn)生的氣溶膠或飛濺物和疫情。此外，在運(yùn)輸和培養(yǎng)過程中也會(huì)產(chǎn)生氣溶膠。

7-由于人手不足，在一批標(biāo)本中處理過多標(biāo)本可能導(dǎo)致無(wú)法遵守規(guī)程，并可能造成交叉污染的錯(cuò)誤

8-污染物進(jìn)入工作和庫(kù)存文化的途徑多種多樣。特別是，由于以下原因，污染物可能會(huì)從我們的皮膚和呼吸系統(tǒng)中逸出：人員清潔不足、皮膚消毒不足、手部衛(wèi)生差、實(shí)驗(yàn)室防護(hù)服和個(gè)人防護(hù)設(shè)備（如外科手術(shù)用一次性手套和外套）不足，所有這些都被不同的研究人員提及。

9-細(xì)胞培養(yǎng)物、鑒定儀器、電子計(jì)算機(jī)、手機(jī)和其他輸入機(jī)器的選擇、儲(chǔ)存和處理不當(dāng)。

-生產(chǎn)設(shè)施薄弱。

-地板、墻壁和天花板粗糙。

-缺乏空氣過濾系統(tǒng)。

-照明和通風(fēng)不當(dāng)。

-通風(fēng)口、窗臺(tái)和排水溝位置不佳。

-清洗、清潔、廁所和儲(chǔ)物柜設(shè)施不足，無(wú)法保證操作衛(wèi)生。

10-使用和處置用于解剖和切割碎玻璃、針頭或刀片的鋒利工具。

-化學(xué)和高溫灼傷或火災(zāi)。

11-標(biāo)簽錯(cuò)誤、溝通不暢、因工作繁忙而過度勞累。

-注意力不集中可能是緊張或混亂、糠麩和健康心理障礙。

-吃東西、喝飲料或使用違禁藥物等不良行為。

12-二氧化碳培養(yǎng)箱所用氣體中的雜質(zhì)。

13-錯(cuò)誤的研究設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)設(shè)置和培養(yǎng)方案。

-脫離科學(xué)依據(jù)的調(diào)查和跟蹤。

-為實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)花費(fèi)不必要的時(shí)間和精力。

污染控制策略

編號(hào)污染控制策略

1-遵守設(shè)施的書面政策。

-不要將化學(xué)品倒入下水道。

-應(yīng)在一天的結(jié)束和開始時(shí)進(jìn)行清潔和去污。

2-采用滅菌方法，如121°C高溫高壓滅菌20分鐘、160°C熱風(fēng)爐1小時(shí)、微濾或超濾、焚化爐、紫外線、火焰、福爾馬林和乙醇。

-使用無(wú)菌設(shè)備和環(huán)境有助于防止給定樣本受到進(jìn)一步污染。即使是用無(wú)菌鋁箔覆蓋的材料也對(duì)研究成果的質(zhì)量起著至關(guān)重要的作用。

3-維護(hù)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。首先，暴露在外進(jìn)行熏蒸。其次，繼續(xù)進(jìn)行空氣采樣以進(jìn)行微生物評(píng)估。第三，調(diào)整實(shí)驗(yàn)室的所有物理因素（實(shí)現(xiàn)房間通風(fēng)系統(tǒng)，在空氣過濾路徑中置換新鮮空氣）；第四，不受人為因素的影響和干擾，最終減少事故發(fā)生的機(jī)會(huì)。

4-確保培養(yǎng)基瓶和燒瓶干燥，并用70%的酒精或5%的次氯酸鈉擦拭，然后才能用于進(jìn)一步制備和放入罩中。

-避免將裝有（培養(yǎng)基、溶液等）的瓶子長(zhǎng)時(shí)間打開，用完后立即關(guān)閉。

5-正確安裝、包裝和處理儀器

-檢查項(xiàng)目的驗(yàn)證日期。

6-在采集和處理樣品時(shí)，應(yīng)在無(wú)菌條件下小心工作。

-用消毒劑清潔工作區(qū)，準(zhǔn)備一個(gè)安全無(wú)菌的工作區(qū)：

·標(biāo)本和小袋應(yīng)逐個(gè)處理。

·樣品去污

·每次只處理一個(gè)細(xì)胞系。

7-減少細(xì)胞培養(yǎng)事故發(fā)生的機(jī)會(huì)，主要可能的解決方案包括：用彩色墨水清晰標(biāo)注分配任務(wù)、書面程序、良好監(jiān)督、分配任務(wù)、精心計(jì)劃和備份

8-跟進(jìn)接種和其他無(wú)菌程序。

-無(wú)菌轉(zhuǎn)移培養(yǎng)物和無(wú)菌溶液。

-制備供研究使用的接種劑和培養(yǎng)物。

-短期和長(zhǎng)期使用庫(kù)存培養(yǎng)物，并將其保存在適當(dāng)?shù)臏囟认拢约霸谥匦率褂们皩?duì)庫(kù)存培養(yǎng)物進(jìn)行無(wú)菌測(cè)試。

-每次只使用一種細(xì)胞系，以有效防止交叉感染。

-不要將飼養(yǎng)培養(yǎng)物長(zhǎng)時(shí)間放在實(shí)驗(yàn)室工作臺(tái)上。

-必須密封培養(yǎng)容器。如果正在發(fā)生蟲害問題，可使用殺蟲劑、石膏和塑料盒進(jìn)行防治。通常使用塑料薄膜包裹培養(yǎng)皿。

-定期對(duì)存活細(xì)胞進(jìn)行觀察篩選，并定期檢查細(xì)胞系的特征，以確定是否存在污染。所有類型的新細(xì)胞在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室時(shí)、細(xì)胞解凍前和解凍后都要進(jìn)行篩查，重要的是要在論文發(fā)表前篩選出不需要的可疑細(xì)胞。

-使用多種技術(shù)對(duì)混合和受污染的細(xì)菌培養(yǎng)物進(jìn)行額外的亞培養(yǎng)，或丟棄受污染的培養(yǎng)物。

9-正確的移液技術(shù)可確保吸液和分液的體積準(zhǔn)確，避免分液時(shí)液體飛濺。

-盡可能將反應(yīng)和成分蓋上蓋子

10-使用具有選擇性和保質(zhì)期的培養(yǎng)基進(jìn)行制備和后續(xù)工作。

-切勿將培養(yǎng)基和生物體存放在有光照的冷庫(kù)中。

-在培養(yǎng)基中添加生長(zhǎng)抑制物質(zhì)

11-氣溶膠會(huì)導(dǎo)致樣品間的交叉污染。

-抗氣溶膠移液器吸頭有一個(gè)屏障，當(dāng)吸頭接觸到潛在的液體污染物時(shí)起到密封作用，將其阻隔在屏障內(nèi)。

12-對(duì)人員進(jìn)行相關(guān)特定目標(biāo)的凈化規(guī)程培訓(xùn)。

-為每節(jié)實(shí)驗(yàn)課提供額外時(shí)間，并在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)花大量時(shí)間保護(hù)自己。

-始終穿戴個(gè)人防護(hù)設(shè)備。穿全袖大衣，將大衣放在培養(yǎng)室內(nèi)，并在經(jīng)過至少30分鐘的紫外線浴后才穿上。

-人員和材料的單向工作流程。

13-保持工作表面和材料整潔有序。

-避免雜亂無(wú)章。

-盡可能使用小容器

-活動(dòng)結(jié)束后，將試劑和其他物品放回原處。

-應(yīng)定期清理設(shè)施。包括地面、天花板和墻壁。

-定期清空垃圾桶

-立即清理任何溢出物。溢出物應(yīng)始終按照正確的處理程序?qū)υ搮^(qū)域進(jìn)行消毒

-使用完所有不必要的設(shè)備后，將其移走并進(jìn)行消毒，然后妥善存放

-在工作之前、期間和之后檢查表面和工具。

-在日志中記錄每個(gè)設(shè)備的清潔狀況

14-在采集、運(yùn)輸、隔離、鑒定和描述樣本時(shí)，始終戴無(wú)菌手套。

-經(jīng)常更換手套，尤其是在對(duì)每個(gè)樣本進(jìn)行DNA和RNA擴(kuò)增時(shí)。

-基本上，盡量不戴手套處理任何東西。

15-微生物實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置是專門為科學(xué)實(shí)驗(yàn)而設(shè)計(jì)的。每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)都有書面實(shí)驗(yàn)記錄。

16-使用標(biāo)準(zhǔn)外科口罩，以保護(hù)呼吸道口腔飛沫的直接接觸。

-準(zhǔn)備標(biāo)本時(shí)應(yīng)避免接觸口罩。

-不要在培養(yǎng)室內(nèi)交談。如果需要，請(qǐng)使用口罩。您的口腔中有真菌，可能是感染源。

可能是源頭。

17-在處理細(xì)胞時(shí)，用適當(dāng)稀釋的酒精（70%）噴灑雙手，直至手肘。

-進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室前用消毒肥皂和溫水徹底洗手。從個(gè)人手部衛(wèi)生開始控制各類污染，并貫穿培養(yǎng)的所有步驟。

18-避免在同一培養(yǎng)箱中同時(shí)培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞、人體細(xì)胞和微生物細(xì)胞。

-使用推薦的溶液清潔培養(yǎng)箱。可每天、每周或每月清洗一次。

19-配備房間通風(fēng)系統(tǒng)，更換空氣過濾通道中的新鮮空氣。

-空氣過濾和換氣率的設(shè)置應(yīng)確保達(dá)到規(guī)定的潔凈室等級(jí)。

-關(guān)鍵區(qū)域的氣流應(yīng)為單向氣流（層流），其速度應(yīng)足以將微粒從填充/關(guān)閉區(qū)域掃除。

-空氣處理管道應(yīng)進(jìn)行清潔和適當(dāng)維護(hù)，并應(yīng)經(jīng)常更換排入培養(yǎng)室空氣的預(yù)過濾器。

20-進(jìn)入櫥柜時(shí)，用70%的乙醇擦拭表面。

-使用前，讓罩內(nèi)的空氣流通5分鐘。這將使任何污染物有望進(jìn)入層流，而不會(huì)最終進(jìn)入培養(yǎng)基或培養(yǎng)皿。

-用于進(jìn)行病毒或細(xì)菌培養(yǎng)的儀器不得用于標(biāo)本制備或裝袋。

-將封閉的樣本和處理用品放入通風(fēng)櫥中，在紫外線燈下照射15分鐘

-樣品處理完成后，用70%乙醇再次擦拭表面

-關(guān)閉紫外線防護(hù)罩，紫外線燈自動(dòng)開啟15分鐘層流氣流罩：

1.注意

-不使用時(shí)保持箱體完全關(guān)閉；始終戴手套；在箱體內(nèi)至少6英寸處工作；頭部遠(yuǎn)離箱體；

2.不要

-快速移動(dòng)導(dǎo)致柜內(nèi)產(chǎn)生大量湍流；在機(jī)罩內(nèi)存放任何物品，因?yàn)檫@些物品可能會(huì)阻擋無(wú)菌氣流并影響無(wú)菌性；對(duì)著機(jī)罩方向打噴嚏或咳嗽；在打開UV和機(jī)柜的情況下操作機(jī)罩；避免快速進(jìn)出機(jī)罩。

污染物對(duì)細(xì)胞/微生物培養(yǎng)及其他的影響

爭(zhēng)奪養(yǎng)分，阻礙細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。

使細(xì)胞分別接觸到不需要的初級(jí)和次級(jí)代謝物的利用和產(chǎn)生。

從數(shù)量和質(zhì)量上改變蛋白質(zhì)、RNA或DNA的合成水平。

改變基因表達(dá)、細(xì)胞信號(hào)、形態(tài)和生理機(jī)能。

在高層次上破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞器。

導(dǎo)致突變和染色體變化。

破壞自然微生物群落結(jié)構(gòu)和功能。

破壞培養(yǎng)物的生長(zhǎng)和特性。對(duì)抑制細(xì)胞新陳代謝產(chǎn)生不利影響。

破壞有價(jià)值的產(chǎn)品，使培養(yǎng)物失去純度和活力。

對(duì)技術(shù)人員、研究人員、醫(yī)護(hù)人員和病人造成多種實(shí)驗(yàn)室感染風(fēng)險(xiǎn)/爆發(fā)。免疫缺陷者對(duì)嚴(yán)重的人類疾病非常敏感。傳播方式的持久性病原體數(shù)量巨大。

影響信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。

成為公共衛(wèi)生問題，可用于生物武器。

造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)挑戰(zhàn)。

研究成果質(zhì)量下降，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確或有錯(cuò)誤記錄。

損失時(shí)間、金錢（細(xì)胞、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基和血清）和精力（用于培養(yǎng)和建立實(shí)驗(yàn)）已經(jīng)發(fā)生

總之，有三種最佳做法可以保持細(xì)胞培養(yǎng)物的完整性和準(zhǔn)確性，并促進(jìn)安全的實(shí)驗(yàn)環(huán)境。首先，使用適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)。第二，使用正確的培養(yǎng)程序。第三，使用合適的清潔程序。這是成功完成實(shí)驗(yàn)的最佳操作。

污染物的未來(lái)發(fā)展方向

實(shí)驗(yàn)室需要有調(diào)查審查程序，以確定異常數(shù)量的假陽(yáng)性培養(yǎng)物，并建立一種機(jī)制來(lái)深入確定可能的原因。至少必須每月或每年進(jìn)行一次隨訪。臨床醫(yī)生、實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員和研究人員之間的持續(xù)溝通對(duì)于解釋交叉感染和自身感染導(dǎo)致的異常結(jié)果仍然至關(guān)重要。今后，我們將重點(diǎn)支持三項(xiàng)活動(dòng)。即：(I).通過各種公認(rèn)的科學(xué)方法（如代謝和遺傳指紋圖譜）鑒定類群。

(II).根據(jù)指示微生物的分離和鑒定，確定潛在危害的來(lái)源、

(III).開發(fā)處理微生物危害的方法。當(dāng)開始探索污染物時(shí)，將有望取得進(jìn)一步的成果，如抗生素生產(chǎn)、醫(yī)療價(jià)值、生物技術(shù)研究和抗菌活性的耐藥性和敏感性檢測(cè)。未來(lái)，通過持續(xù)的研究產(chǎn)生全面的科學(xué)知識(shí)非常重要，甚至可以在微生物多樣性（群落、功能和結(jié)構(gòu)）模式領(lǐng)域進(jìn)行調(diào)查。我們將在該領(lǐng)域開展更多的系統(tǒng)研究，以消除令人沮喪和破壞性的想法：完成獨(dú)特的工作，并獲得合適的有活力的純培養(yǎng)物。其優(yōu)點(diǎn)將大于缺點(diǎn)。

結(jié)論

總體而言，本研究報(bào)告指出，實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和環(huán)境是潛在的污染源，其濃度很高。要解決這個(gè)問題，必須采用各種方法。如今，定期制定、實(shí)施和重新驗(yàn)證規(guī)程是最可接受和最經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的選擇。建立控制點(diǎn)對(duì)所有人都至關(guān)重要。從采集樣本到處理樣本，每一步都要考慮到關(guān)鍵點(diǎn)，采取適當(dāng)而謹(jǐn)慎的管理策略，可以大大降低污染負(fù)荷。最后，本文得出結(jié)論，污染物會(huì)造成研究工作的損失，并干擾中心細(xì)胞教條的正常安排或功能。因此，本文有助于解決微生物實(shí)驗(yàn)室中污染物的短期和長(zhǎng)期影響問題。總之，污染是可以完全消除的，但可以通過引入良好的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范來(lái)降低其發(fā)生頻率和后果的嚴(yán)重性。

建議

應(yīng)經(jīng)常對(duì)物理、化學(xué)和微生物組合進(jìn)行季節(jié)性調(diào)查和持續(xù)監(jiān)測(cè)，以保持培養(yǎng)物的純度。基于實(shí)際情況的后續(xù)控制機(jī)制應(yīng)能消除交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。